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Biocytex
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ClinisciencesFortessa
Becton dickinson Fortessa
Cet analyseur est équipé de 4 sources d'excitation, d'un PMT sur le paramètre taille FSC permettant la détection de microparticules / microvésicules (>0,2µ) et d'un SSC sur le laser 405nm. Un vrai laser UV a été installé pour une meilleure détection des cellules souches de phénotype "Side Population".
- 4 lasers: violet (355nm/UV), violet (405nm), bleu (488nm) and rouge (635nm)
- Analyse multicouleurs jusqu’à 17 paramètres dont 14 fluorescences (PMT) et un PMT en FSC (microparticules / microvésicules > 0,2μm)
- Vitesse d'acquisition jusqu’à 20000 événements/seconde
Cet appareil est dédié aux analyses de cellules de classe L1 et L2 ne contenant pas d'agents pathogènes pour l'homme.
Configuration optique
| Laser | Puissance(1) | Filtres(2) | Fluorochromes |
|
Genesis UV/355 nm |
20mW |
BP450/50 LP670 |
Hoechst 33342 bleu, Dapi, Indo-1 Hoechst 33342 rouge |
|
Coherent Cube 405 nm |
50mW |
BP450/50
BP525/50 BP605/12
|
Brillant Violet 421, BD Horizon V450, Pacific Blue, CFP eFluor450 Brillant violet 510, BD Horizon V500, AmCyan, Qdot525 Brillant violet 605, Qdot605, BD Horizon 605 |
|
Coherent Sapphire 488 nm |
50mW |
BP488/10 BP530/30 BP585/15 BP610/20 BP695/40 BP710/50 BP780/60 |
SSC FITC, Alexa Fluor 488, GFP, SYTOX Green, YFP PE PE-texas red, IP PerCp, PE-Cy5, PE-Cy5.5, PerCp-Cy5-5, IP, 7AAD PerCP-eFluor® 710 PE-Cy7 |
|
Coherent Cube 635 nm |
40mW |
BP670/30 BP730/45 BP780/60 |
APC, Alexa Fluor 647, SYTOX Red Alexa Fluor 700 APC-Cy7, APC-H7, Alexa Fluor 750, DRAQ5 |
(1) Puissance des lasers ajustable par fonction logicielle; (2) Filtres et miroirs dichroïques interchangeables
SERVICE DE CYTOMETRIE EN FLUX
Responsable scientifique et technique de la cytométrie en flux
Clay Denis - IE1 INSERM
Tél: 0145595304
E-mail: Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser.
Presentation
PRESENTATION
Le plateau technique de cytométrie en flux est un service indispensable pour l'avancement des projets des différentes unités au sein de la structure fédérative régionale SFR du site de l'Hôpital Paul Brousse. Les chercheurs qui font appel à ce plateau travaillent dans des domaines variés tels que les cellules souches embryonnaires, les cellules souches adultes et leur microenvironnement, la cancérologie, l'hématologie ou bien encore l'hépatologie.
Ce service de cytométrie est accessible à tout utilisateur (interne ou externe au site) exprimant des besoins en cytométrie en flux et en tri cellulaire.
La qualité de ce service est maintenue par:
- Recherche et développement avec la mise en place de techniques innovantes et de projets collaboratifs.
- Constante amélioration des appareils
EQUIPEMENT
Trieur cellulaire
- BD FacsAria SORT (5 lasers, 16 détecteurs de fluorescence, PMT FSC)
Analyseurs
- BD Fortessa (4 lasers, 14 détecteurs de fluorescence, PMT FSC, SSC en 405nm)
- Deux BD Accuri (1 laser et 1 diode, 4 détecteurs de fluorescence) dont un avec un passeur (Sampler plus)
TECHNIQUES
L'expertise de ce plateau technique permet de proposer les prestations suivantes:
- Caractérisations des cellules souches et tris d'événement rares CSH, CSE, CSC, CSM...)
- Tri et analyse multiparamétrique des cellules souches couplées à des fonctionnalités cellulaires (Side Population, ALDH).
- Tri clonale avec caractérisation de chaque cellule (index sort BD).
- Cycle cellulaire sur cellules vivantes (Hoechst, Pyronin Y) ou fixées (phase du cycle, cyclines), ploïdie, prolifération, apoptose.
- Analyse et tri de microparticules / microvésicules.
- Analyse er tri de spermatozoîdes.
- Marquage multicolore extra (>10) et intracellulaire
- Mesure d'une activité cellulaire (Pompes MDR, Flux calcique)
BD FacsAria SORP
Le trieur est un FacsAria dit Sorp spécialement conçu pour la recherche.
Il est équipé de 5 sources d'excitation (355, 405, 488, 561, 633 nm) et d'un PMT sur le paramètre taille FSC permettant la détection et le tri de microparticules. Un vrai laser UV a été installé pour une meilleure détection des cellules souches de phénotype "Side Population".
19 paramètres sont disponibles dont 16 en fluorescence (PMT) + un PMT en FSC (microparticules / microvésicules > 0,2μm).
ce trieur est dédié aux tris de cellules de classe L1 et L2 ne contenant pas d'agents pathogènes pour l'homme.
Configuration optique
| Laser | Puissance(1) | Filtres(2) | Fluorochromes |
|
Genesis UV/355 nm |
100mW |
BP450/50 LP670 |
Hoechst 33342 bleu, Dapi, Indo-1 Hoechst 33342 rouge |
|
Obis 405 nm |
100mW |
BP450/50
BP525/50 BP610/20 BP670/30 |
Brillant Violet 421, BD Horizon V450, Pacific Blue, CFP, SYTOX Blue eFluor450 Brillant violet 510, BD Horizon V500, AmCyan, Qdot525 Brillant violet 605, Qdot605, BD Horizon V500 Brillant violet 650, Qdot655 |
|
SapphireHP 488 nm |
100mW |
BP488/10 BP530/30 BP695/40 |
SSC FITC, Alexa Fluor 488, GFP, YFP, SYTOX Green PerCp, PerCp-Cy5-5, IP, 7AAD |
|
SapphireHP 561 |
100mW |
BP585/15 BP610/20 BP670/30 BP710/50 BP780/60 |
PE, DsRed, dTomato PE-texas red, IP, mCherry, mRasberry, mStrawberry, mRFP PE-Cy5, 7AAD, PE-Cy5.5 Pe-Alexa 700 PE-Cy7 |
|
Obis 640 nm |
40mW |
BP670/30 BP730/45 BP780/60 |
APC, Alexa Fluor 647, SYTOX Red Alexa Fluor 700 APC-Cy7, APC-H7 |
(1) Puissance des lasers ajustable par fonction logicielle; (2) Filtres et miroirs dichroïques interchangeables
Applications
- Tri 1 à 4 voies en micro-tubes, Eppendorf, 12x75 mm et 15ml. En réglages manuels, possibilité de trier sur une plaque 96 puits
- Cellules Souches (Side population : Exclusion de Hoechst 33342)
- Tri en plaque de 6/12/48/96 puits
- Clonage de populations en plaque de 96/384 puits avec caractérisation phénotypique (BD Index sort)
